合成多肽药物有关物质研究中几个需关注的问题

 1、同时采用不同原理的方法进行合成多肽的有关物质研究     由于合成多肽中有关物质的复杂性，且某一特定研究方法总会存在一定的局限性，因此对于合成多肽药物、尤其是新合成多肽的有关物质研究而言，通常需同时结合使用不同原理的方法进行有关物质研究。一般认为，对合成多肽杂质认知的程度与研究中使用的独立技术的数量成正比。常见的合成多肽的有关物质研究方法包括基于各种不同原理的高效液相色谱法（如反相HPLC法、离子交换HPLC法、分子排阻HPLC法）、毛细管电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）以及激光散射等。其中，反相HPLC法基于疏水性的分离机制，离子交换HPLC法依据多肽分子所带电荷的差异，毛细管电泳的分离基础是荷质比。分子排阻HPLC法的分辨能力虽然较反相HPLC法低，但相对于其他HPLC方法而言较适用于聚合物的检查。此外，激光散射法是目前测定多肽中聚合物的有效方法。 2、反相HPLC法应尽量采用梯度洗脱方法     目前，反相HPLC法是最常用的合成多肽有关物质研究方法。但是由于合成多肽中存在的有关物质的性质相差较大，采用简单的等度洗脱的方法往往很难充分检出产品中存在的各种有机杂质。以生长抑素为例，研究显示采用梯度洗脱方法无论是检出的杂质个数还是检出杂质的含量均明显高于等度洗脱方法，如图1、2。目前，国外上市的合成多肽产品（醋酸丙氨瑞林、醋酸奥曲肽、特利加压素、鲑降钙素、生长抑素等）的有关物质检查方法多采用梯度洗脱方法。因此，采用反相HPLC法进行合成多肽有关物质研究时应尽量采用梯度洗脱方法，当然梯度程序的选择应以尽可能多得检出杂质为前提。